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有科学依据表明:心头的伤总是很难愈合的!

发布日期:2022-10-26 浏览次数:737

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原代心肌细胞的分离培养



01

心脏缺乏自我修复和再生能力

如果手指不小心被割伤,要不了几天,伤口就会自行愈合,那么究竟是什么魔力让伤口愈合了呢?

答案就是:人体具有自我修复的能力。

此前,美国健康杂志刊出了《人体具有神奇的自我修复功能》的文章,该研究也证实了人体的某些器官可以持续不断的更新,这些器官主要有:皮肤、骨骼、血管、肝脏、肺脏、肠道、肾脏、大脑。但是,并不是所有的器官都具有再生能力的,今天我们要说的器官就是心脏。


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02

心脏的组成结构和主要功能

人的心脏位于胸腔中部稍偏左下方,呈圆锥形,体积约拳头大小,重量约250g,女性的心脏通常要比男性小且轻。心脏是中空的肌性器官,主要由心肌构成,有左心房、左心室、右心房、右心室四个腔,心房与心室之间有瓣膜,这些瓣膜使血液只能由心房流入心室,而不能倒流。组成心脏的心肌有节律地收缩和舒张形成心脏的搏动。心肌收缩时,推动血液进入动脉,流向全身;心肌舒张时,血液由静脉流回心脏。所以,心脏的搏动推动着血液的流动,是血液运输的动力器官。心脏通过向器官、组织提供充足的血流量,以供应氧和各种营养物质(如水、无机盐、葡萄糖、蛋白质、各种水溶性维生素等),并带走代谢的终产物(如二氧化碳、尿素和尿酸等),使细胞维持正常的代谢和功能。


心肌(cardiac muscle)是由心肌细胞构成的一种肌肉组织,广义的心肌细胞包括组成窦房结、房内束、房室交界部、房室束和浦肯野纤维等的特殊分化的心肌细胞,以及一般的心房肌和心室肌工作细胞。前5种组成了心脏起搏传导系统,它们所含肌原纤维极少,或根本没有,因此均无收缩功能;但是,它们具有自律性和传导性,是心脏自律性活动的功能基础;后两种具收缩性,是心脏舒缩活动的功能基础。

在心肌梗死、心力衰竭等心血管相关疾病发生过程中,心肌细胞的损伤和死亡是主要的病理过程,而坏死的心肌将会根据坏死面积的大小不同程度地影响心脏的功能,轻则影响生活质量,重则造成心衰、心律失常、猝死等严重后果。心血管相关疾病之所以致命的原因之一,也是由于其不能修复和再生。因此,心肌细胞不能再生,死一个就会少一个,大家一定要保护好自己的“小心脏”,预防心血管疾病的发生。


03

心肌细胞在医学研究中的应用

心肌细胞是一种终末分化的成熟细胞,在维持心脏正常形态、结构方面具有重要意义。近年来,心脏的生理、病理发展研究和心血管相关药物开发及药理探究多采用体外培养的心肌细胞作为研究对象。原代心肌细胞培养技术已广泛应用于心血管疾病机理及心血管药物和心脏组织工程学的研究。


上海昆盟生物可以为生物医学界的科研者们提供原代心肌细胞产品以及相关的细胞分离培养实验技术指导。我司分离培养的乳鼠心肌细胞存活率高,心肌细胞和非心肌细胞分离较彻底,细胞贴壁快、纯度高、节律性的同步收缩时间早、操作简便、重复性好。该细胞可以满足心血管疾病发生、发展机理及心血管药物和心脏组织工程学的研宄及多种生理生化实验的要求。



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心肌细胞刚接种时形状为圆形或椭圆形,大约在24h左右基本贴壁,此时细胞伸出伪足,伪足在镜下为纤维状条索,细胞胞体则呈现不规则形状,如多角形,部分细胞有聚集倾向,细胞搏动效果较好,培养基在初始培养时为深红色,两天后变为淡黄色,应该是营养成分下降的表现,也说明细胞生长状况良好。



大鼠乳鼠心肌细胞原代分离培养方法

1. 将胰酶提前取出温育,II型胶原酶解冻。2. 解剖取材:将乳鼠放入75%酒精中浸泡1~2min,棉球擦干。左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部,右手取一把眼科直剪剪开皮,充分撕拉开,再用酒精棉球消毒后,取一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨,然后在切口中间横剪胸骨。这样只要左手稍顶,乳鼠的心脏就直接跳出来。然后用眼科弯镊从心脏中部直接将心室部分剪下,放入冰浴的 D-Hank's 液中。重复以上过程。取材完毕后,撤掉取材的手术器械。注意:为了保证心肌细胞的活力,取心的操作过程尽量快,另外,最好把盛放心脏的培养皿放置在冰台上或者预冷的平衡盐液中。3. 用第二套手术器械进行下列操作。用眼科直镊和眼科弯剪把培养皿中的心脏周边的血凝块及纤维组织剔除掉,放在另一个预先装好D-Hank's液的培养皿中,把心脏组织再洗一遍后,将心脏组织放在另外一个培养皿中(或者其它合适容器中,视个人习惯),加少许终浓度0.05%的胰酶,用眼科弯剪将心脏组织剪成1mm3大小的碎块,将剪碎的心脏和胰酶液转入15ml离心管中,另外吸取2-3ml新鲜的胰酶冲洗平皿和剪刀并转入锥形瓶中,补加胰酶至终体积5ml,盖好盖子并用封口膜密封,放在37℃震荡摇床中,调节转速至60rpm左右,消化15min。4. 取出离心管,稍静置后吸去上清。5. 加入胰酶和II型胶原酶的混合消化液,并加入用一支新的吸管吹打溶液几次,机械分散细胞;37℃震荡再消化10~15min;上述消化处理的同时,往一支50ml离心管中加入 20ml预冷的含 10%血清的培养液,并放置冰台上。消化处理之后,小心移出上清转至上述加有培养液的离心管中,第一次消化收集的分离出的细胞,第一次消化结束后;继续第二次消化,余下的组织块加入10ml 新的胰酶继续消化。6. 重复上述消化步骤,直至剩余少许组织块为止,一般消化4~5次可以消化绝大多数的组织块(不含弃去消化液的那次)。7. 第 1、2 次含细胞的消化液放在一根离心管中,过筛网后一起离心;第 3、4 次含细胞的消化液放在一根离心管中,过筛网后一起离心。最后分别用含20%血清的DMEM/F12培养液重悬两管细胞,接种到培养皿中,放置培养箱中30-60min,取出弃贴壁细胞(主要是成纤维细胞和内皮细胞),将未贴壁的细胞悬液取出,调整细胞浓度为5~6x10^5个/ml,接种到目的培养器皿中。为抑制成纤维细胞生长,可加入BrdU。

8. 接种后24小时,用温的培养基或者平衡盐液轻轻冲洗培养的心肌细胞一次,以去除未贴壁的细胞,再更换培养液即可。可以按照实验需要在培养48h或72h后施加处理。