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荧光成像外泌体示踪实验

点击上方蓝字关注消防知识荧光成像外泌体示踪实验一. 实验背景1. 外泌体外泌体(Exosome)主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中,直径约为30-150nm,密度1.13-1.21g/mL。外泌体中携带有蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA和脂质成分等。外泌体天然存在于各种体液中

2022-11-11

双荧光素酶报告基因检测

荧光素(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称,其中萤火虫荧光素 F-Luciferase 和海肾荧光素 R-Luciferase 最具有代表性。目前,双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。这两种酶的主要区别:1. 物种来源不同;2. 它们的底物和辅因子不同;3. 发光的颜色不同。萤火虫萤光素酶是一种胞内蛋白,从甲虫(

2022-11-11

原代细胞分离培养都有哪几种方法?

研究中常用的细胞系/株系是现成的,我们只需要进行细胞传代和种子保存。然而,这些细胞系往往因长期体外培养而失去原有的生物学特性,对药物治疗的反应差距越来越大。因此,越来越多的人选择原代细胞。来源于胚胎、组织、器官和外周血,经特殊分离方法制备的原代培养细胞称为原代细胞。原代细胞培养,也称为原代培养,

2022-11-10

新生SD大鼠大脑皮层神经元原代分离培养

一.实验方法1.多聚赖氨酸(Poly-D-Lysine)包被培养板的制备:原代分离进行前一天,用PBS缓冲液配制终浓度为0.1mg/ml的多聚赖氨酸工作液,0.22μm滤膜过滤除菌,于超净工作台内吸取1ml加入六孔板内,确保覆盖板底,静置孵育30min后吸出(可回收反复使用2-3次),用无菌水清洗培养板,置于超净台内晾干,照紫外过夜。2.次日,

2022-11-10

SD大鼠乳鼠心脏微血管内皮细胞原代分离培养方法

1.将新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min,开胸,取出心脏后于含有双抗的预冷过的D-HANKS中漂洗两遍,移入超净台。2.仔细剪除大血管,左右心房及右心室和室间隔,保留左心室,去除内、外膜,PBS清洗。3.用眼科剪将心室肌剪碎至约1mm3,滴加1ml胎牛血清,均匀接种于6cm细胞培养皿内,组织块间隔1-2mm,放入5% CO2,37℃恒温培养

2022-11-09

SD大鼠牙髓干细胞原代分离培养方法

1. 处死动物,分离下颌骨,自中缝处将其分为两半。2. 打开髓腔,取出牙髓,去除顶端的apical button,在培养皿中用显微剪剪碎,注意冰上操作。3. 将牙髓转入15ml离心管中,终浓度1.5mg/ml的Collagenase I于37℃,5% CO2条件下消化40min。4. 加入完全培养基(MEM+10%FBS+1%双抗)终止消化,4℃,360g离心10min收集沉淀。5. P

2022-11-09

DNA pull-down实验

DNA pull-down实验原理DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做Western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如:转录因子、组

2022-11-08

GST pull-down实验

pull-down实验原理pull-down技术是将"诱饵"蛋白与一种易于纯化的配体标签(如:GST标签、His标签)进行融合表达,而带标签的诱饵蛋白能被特异结合该标签的固相亲和配基捕获,形成"次级亲和支持物",用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。纯化产物洗脱后,经Western blot验证或LC-MS/MS,即鉴定与诱饵

2022-11-08

RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)

昆盟生物可以为广大科研用户提供高品质的RIP实验及检测服务,详情请咨询我司业务员。实验原理RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,简称RIP)是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,可以帮助我们发现miRNA 的调节靶点。RIP技术运用目标蛋白的抗体把相应

2022-11-07

染色质免疫共沉淀技术(ChIP)

染色质免疫共沉淀技术(ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,利用该技术不仅可以检测体内转录因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。周期:2--3周。ChIP流程实验步骤1. 取对数生长期的细胞,每个10cm培养皿中加入10ml核抽提液(10mM Hepes PH7.6,1M 蔗

2022-11-07

ChIRP实验及检测服务

上海昆盟生物科技有限公司可为广大用户提供高品质的ChIRP实验以及后续检测服务,详情请咨询我司业务员。 ChIRP原理Chromatin Isolation by RNAPurification(ChIRP)是一种检测与RNA绑定的DNA和蛋白相互作用的方法。该方法是通过设计生物素或链霉亲和素探针,把目标RNA拉下来以后,与其共同作用的DNA

2022-11-04

CUT&Tag技术 | 蛋白质-DNA互作研究新利器

CUT&Tag技术CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation),即靶向剪切及转座酶技术,通过能够与抗体结合的Tn5转座酶靶向目标蛋白,对蛋白结合位点附近DNA进行切割与标记,然后利用Tn5接头序列进行后续建库测序。该技术是一种利用酶锚定技术进行高效、高分辨率的DNA测序文库构建方法,适用于蛋白质-DNA互

2022-11-04

宏基因组测序mNGS在新型冠状病毒检测中的应用

此次新型肺炎疫情监测和防控中,病原宏基因组测序(mNGS)发挥了至关重要的作用,利用其技术优势,研究人员在5天内就鉴定分析出新型冠状病毒的基因组,而2003年SARS的鉴定耗时5月余、2013年H7N9的鉴定耗时1月余。2020年2月5日,武汉大学病毒学国家重点实验室、武汉大学中南医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院和中山大

2022-11-03

肠道微生物调节机体对心血管药物的反应

心血管疾病(CVD)仍然是全球范围内主要的死亡原因。肠道菌群的改变与动脉粥样硬化,血脂异常,高血压和心力衰竭有关。微生物群具有代谢药物的能力,这引起了药物药代动力学和药效学改变或形成有毒代谢物,从而干扰药物的反应。早期有证据表明,肠道微生物组可调节对机体对他汀类药物和降压药物的反应。因此,肠道微生物组对

2022-11-03

肝脏EV转运miRNA调控脂肪组织重塑的机制研究

2020年2月5日,南京大学医学院赵越、方雷、李朝军团队的最新研究发表在国际著名学术期刊《Nature Communications》上(影响因子11.878),题目为《Liver governs adipose remodelling via extracellular vesicles in response to lipid overload》,本文揭示了在营养过剩状态下,肝脏感知机体营养状态,重塑脂肪组织功能,调

2022-11-02