实验步骤

① 将实验小鼠脱颈处死，75%乙醇浸泡5min，固定，备皮，取背部皮肤至于含双抗的冷PBS缓冲液中。

② 仔细剥离脂肪，血管等多余组织，PBS清洗，加胰酶消化1h。

③ 分离真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。

④ 将真皮部分于培养皿内剪碎，加入适量胰酶，转移至15ml离心管内，37℃恒温水浴消化1h。

⑤ 消化结束后，加入H-DMEM完全培养基终止反应，1000rpm离心5min，弃上清。

⑥ PBS清洗一遍，离心弃上清。

⑦ 将清洗后的组织块均匀铺于6cm培养皿内，加入2ml完全培养基，37℃，5%CO₂培养箱内培养24h。

⑧ 第二天，补充培养基至5ml，继续培养，3-4天后有细胞游出。

⑨ 7天后已有大量细胞游出，去除组织块并换新鲜培养基继续培养

细胞培养结果