分子互作实验

一、技术简介

Pull-down实验，又称拉下实验，是一种体外亲和纯化技术。

二、技术原理

将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），但细胞抽提液经过该基质时，可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。

三、应用场景

1.验证已知蛋白相互作用：通过将已知的诱饵蛋白与可能相互作用的猎物蛋白进行Pull-down实验，若能检测到猎物蛋白的存在，则可验证两者之间的相互作用关系。

2.筛选未知蛋白相互作用：将诱饵蛋白与细胞裂解液或其他蛋白质混合物进行Pull-down实验，然后对结合的蛋白质进行鉴定，可筛选出与诱饵蛋白相互作用的未知蛋白。

3.研究蛋白质复合物组成：通过Pull-down实验分离出蛋白质复合物，然后对复合物中的蛋白质进行鉴定，可确定蛋白质复合物的组成成分。

4.研究蛋白质与核酸相互作用：利用DNA Pull-down和RNA Pull-down技术，可研究蛋白质与DNA、RNA之间的相互作用，如转录因子与启动子的结合、RNA结合蛋白与RNA的结合等。

四、技术优势

可以确定目的蛋白和检测蛋白是否可以发生直接相互作用。

五、样本类型

新鲜细胞（贴壁细胞/悬浮细胞）、冻存细胞、冻存组织、裂解液样本。

六、样本需求

细胞样本：约5×10^6个（可以是2个6cm皿，或以悬浮细胞形式存储于离心管中，或2个T25瓶）；

冻存组织：约40mg；

裂解液样本：蛋白浓度不低于2mg/mg，蛋白总量不低于3mg。

七、样本准备&运输

活细胞样本：距离较近的可提供新鲜样本，将培养在皿/T25瓶/离心管内的新鲜细胞样本常温快递（最迟次日达）运输，本市内可闪送或亲自递送，距离较远的，可-80℃冻存细胞干冰运输；

组织样本&裂解液样本：-80℃冻存干冰运输。

八、需提供的试剂

如进行WB检测，需提供相应抗体。

九、实验周期

3-4周（不包含质谱）

十、其他

RNA-Pull-down、DNA-Pull-down、GST-Pull-down，具体需告知种属及目标蛋白，后续检测Western blot/蛋白质谱，融合蛋白体外表达费用需根据具体目标蛋白单独评估计算。